一、样本采集的原则

1.影响检测结果的因素

（1）样本是否新鲜无污染。

（2）选择合适的样本及样本数量。（例：千头猪场抗体评估需30份血清）

（3）注意生物安全防范，防止交叉污染。  

（4）清晰的背景信息，避免活疫苗免疫后检测。

2. 基本原则

（1）疾病动态过程：蓝耳病的病毒血症期短，血液中难捕捉病毒。病毒血症期过后须选择更敏感样本（如组织、拭子）。  

（2）样品采集要明确检测目的，是病毒分离、诊断还是测序；操作需规范，避免交叉污染；背景信息准确性，需记录免疫史、采样时间等关键信息。  

（3）注意样本保存与运输，蓝耳病病毒易降解，需冷冻保存运输。

（4）样品处理与检测流程须符合标准，提取和扩增试剂注意匹配。  

二、样本采集、处理与保存

1. 样本采集

（1）血液样本：通过前腔静脉采血（在两前肢与气管交汇处针头偏气管15°进针）或尾静脉采血（尾骨间凹陷处15°-30°进针深12mm）。血液低速离心分离血清。血清状态分为七个等级：一级为标准样本，血清呈半透明、淡黄色，无胶冻状。三级以上溶血不能用于检测，会造成假阳性。

（2）拭子样本：包括咽拭子（采扁桃体擦拭液）、鼻拭子（双鼻孔各转3圈）、肛拭子（棉签入直肠2-3cm）。

（3）唾液样本：多应用于大栏采样。采样时间一般选择采食前/后2小时，咬绳时间控制在30分钟，须添加核酸保护剂防降解。

（4）组织液样本：主要研究样本为猪扁桃体口腔擦拭液和舌尖液。当其检测为阴性时，其对应的同窝活仔猪群实际未感染PRRSV的概率极高。

2.样本处理

混样规则：组织≤5份/混样；拭子≤3份/混样；异常样本单独检测。

拭子类：使样本浸入生理盐水旋涡震荡完全。

粪便样本：低速离心去除杂质，取上清检测。  

干燥样本：适量加生理盐水，控制量在能够满足复检即可。

组织样本：充分匀浆后离心。

3.样本保存

血清：20℃以下稳定（30℃以上降解快）。 

口腔液、粪便：需冷冻（-80℃长期最佳）。口腔液反复冻融易降解。

三、蓝耳检测数据分享

1. 监测方案

母猪场：季度监测（4次/年），30份血清/次；

育肥场：1000头抽10份，2000头抽20份血清；

抗体合格标准：阳性率≥90%，离散度<40%。

抗原的动态监测基本上是采集母猪的这个口/鼻/肛拭子以及睾丸液进行监测。

2.试剂盒选择

不同厂家试剂盒检测数据的离散度差异大，有的检测离散度低于40%，有的高于40%，不能一定说明猪养的好或不好，要根据自己生产的实际情况注意甄别。

3.抗原各个样本的检出率

检出率最高的是拭子，口/鼻/肛的拭子一起采完之后完成检测，没有进一步细化区分检测率。检出率第二是血液，第三是睾丸液。      

总结

1. 样品采集须遵循选择敏感样本、明确检测目的、规范操作、背景清晰等原则。

2. 应用科学的方法完成样本的采集和处理，确保低温保存和运输，有效的的样本是检测结果准确的基础。  

3.制定合理的监测方案，注意对试剂盒的甄别，根据本场生产情况客观理性解读检测数据。

会议笔记由维科控股集团股份有限公司石薇琳记录整理。