一、研究背景

PRRSV的高度变异性导致PRRS难防难控，因此对该疾病的日常监测及抗体诊断就显得尤为重要。一直以来从抗原检测方面都能够很好的区分美洲型与欧洲型PRRSV。应用本研究的这两款试剂盒在抗体检测方面我们同样可以将它们进行区分。

猪病常见的国外进口ELISA检测试剂盒很多是基于单抗的阻断/竞争ELISA方法。王老师的观点认为，一方面应用单抗进行检测产品的研发能够保证产品的特异性；另一方面间接ELISA检测方法对于抗原的制备要求更为严格，技术更加繁琐。因此团队聚焦于单抗创制了这两个诊断方法的试剂盒。

二、N阻断/M竞争ELISA试剂盒的研制及特点

《PRRSV单抗阻断ELISA抗体检测试剂盒-N蛋白抗体》

研发团队实验室获得的N蛋白单克隆抗体识别N蛋白末端表位，并能够暴露于N蛋白的同源二聚体表面。保证了抗体检测的准确性和广谱性。

经实验验证其能够被阳性血清阻断，能够用于阻断ELISA检测方法的建立。经过条件摸索，多次反复检测验证，并与IDEXX试剂盒对比发现，该方法能够在病毒感染后早于IDEXX试剂盒检出抗体，保证检测敏感性与特异性的同时能够减少假阳性的检出，节约猪场成本。

小结：

1.在国际上首次成功研制PRRSV N蛋白单抗阻断ELISA抗体检测试剂盒；

2.该试剂盒特异性好，敏感性高；

3.该试剂盒可用于猪蓝耳病阴性猪场日常监测；

4.该试剂盒可用于猪蓝耳病净化过程中抗体监测；

5.该试剂盒可用于猪蓝耳病防控定期抗体监测，根据抗体阳性率、阻断率等数值变化判断猪场感染猪蓝耳病病毒的状况；

6.该试剂盒可用于猪蓝耳病疫苗免疫或野毒驯化的效果评估。

《PRRSV单抗竞争ELISA抗体检测试剂盒-M蛋白抗体》

该M蛋白单抗能够识别所有美洲型毒株，而不识别欧洲型毒株。该试剂盒在病毒感染后的抗体检出时间虽晚于N蛋白试剂盒，经过多次检测结果表明，在PRRSV感染后M蛋白产生的抗体水平能够持续上升，而N蛋白抗体则随着时间推移在4-5w后有所下降。并且M抗体检测结果与血清中和实验具有相关性，但N蛋白抗体检测结果及IDEXX试剂盒检测结果与血清中和实验完全不具有相关性。因此该方法能够在一定程度上反映中和抗体水平。

经过大量临床血清样品检测结果表明，M试剂盒检出率多于N试剂盒，且检出多为仔猪血清，经IFA验证确定为阳性。因此该方法用于仔猪血清抗体检测能够有效避免单纯检测N抗体造成的假阴性结果导致的猪场损失。

总结

1.在国际上首次成功研制北美型PRRSV M蛋白单抗竞争ELISA抗体检测试剂盒，其敏感性高，特异性好；

2.检测仔猪母源抗体时，M蛋白持续时间长于N蛋白抗体；

3.该试剂盒检测特异性优于进口M蛋白间接ELISA抗体检测试剂盒；

4.该试剂盒与N蛋白抗体检测试剂盒配合使用，能够使仔猪抗体检测结果更准确。

会议笔记由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所冯子萱记录整理。