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银水湾论坛会议笔记|高玉龙研究员:禽白血病净化技术体系的建立

一、导言

高玉龙研究员首先指出,禽免疫抑制病病毒主要包括法氏囊病毒、马立克病毒、禽白血病病毒、鸡网状内皮组织增殖症病毒、鸡传染性贫血病毒、病毒性关节炎病毒、腺病毒及偏肺病毒;其中禽白血病、鸡网状内皮组织增殖症、鸡传染性贫血、病毒性关节炎同时属于重要的垂直传播性疾病。这类病毒均以免疫细胞为靶细胞,通过在细胞内复制破坏免疫细胞,导致机体免疫功能下降,“免疫抑制病” 也因此得名。这类病毒除了能够引起免疫抑制外,还可引发肿瘤、关节病变、肝脾肿大等多种临床综合征。

二、国内禽免疫抑制病流行现状与禽白血病行业危害

1.当前主要禽免疫抑制病流行现状

讲者团队基于2016-2025年近十年的禽免疫抑制病流行病学调查数据显示,IBDV和CIAV的阳性率持续处于高位;其中法氏囊病当前流行毒株以变异株为主,同时伴随超强毒突变株的出现。针对鸡传染性贫血,讲者进一步指出了当前养殖业面临的防控困境:目前尚无正规获批的疫苗。

近年来马立克氏病在白羽和蛋鸡父母代场发病率升高,尽管现有疫苗(如CVI988、814、meq缺失疫苗)在实验条件下保护力良好,但MD临床散发频发,提示需进一步审视疫苗毒株的匹配性,以及MDV与ALV、CAV混合感染的关联等问题。

2.禽白血病病原学基础

梳理完当前主要禽免疫抑制病流行现状后,讲者把重点转向禽白血病,详细讲解了禽白血病病原学基础知识。

从病原分类来看,禽白血病病毒属于逆转录病毒科α-逆转录病毒属,分为A-K共11个亚群,能够感染家禽的亚群为A、B、C、D、E、J、K这7种,其中A、B、C、D、J、K亚群是致病的外源性病毒,E亚群是内源性病毒。讲者进一步指出目前我国鸡群中流行的优势亚群为A、B、J、K亚群,且ALV-A、B亚群主要诱发淋巴白血病,ALV-J亚群主要引起髓细胞瘤和血管瘤,ALV-K亚群则主要引发神经胶质瘤。

从传播特征来看,禽白血病以垂直传播为主要途径,同时可发生水平传播。讲者通过对比家禽常见病原的传播特征,指出禽白血病的垂直传播能力更强,但水平传播能力较弱。这也决定了禽白血病可通过标准化流程实现净化,且净化难度相对更低。

从发病特征来看,讲者指出了该病具有逐级放大的特点。重点强调4周龄之前的雌鸡易感,尤其是刚出壳的雌鸡。若在此阶段发生先天感染,鸡只将产生免疫耐受,终身带毒排毒,成为鸡群中极其危险的传染源,这也是生产中坚持开展胎粪检测、及时剔除阳性雏鸡的核心原因,减少免疫耐受雏鸡。

3.ALV-J的流行演变与种源危害

回溯ALV-J的流行演变,1988年英国首次从肉鸡中分离J亚群禽白血病病毒;1999年国内首次报道ALV-J感染;2002年我国首次发现ALV-J能引起蛋鸡发生肿瘤;2008年起蛋鸡、黄鸡群集中爆发,每年约6000万羽商品蛋鸡因发病淘汰,波及国内三分之二的种禽企业,导致大型祖代场倒闭;2017-2018年进口白羽祖代鸡的父母代鸡群也出现大面积感染。

通过对地方品种鸡ALV-J的gp85序列进行分子流行病学分析,讲者揭示了ALV-J进化趋势:2013年以前主要由肉鸡传到本地鸡;2013-2018年形成了本地鸡独立的流行趋势;2018年以后又出现新的变异,形成新独立分支。

4.当前毒株变异与亚群分布

讲者团队通过分离大量毒株发现国内流行毒株的复制能力远远超于英国最高分离毒株HPRS-101,讲者团队发现RBD内的N123I位点突变提高了ALV-J的复制和传播能力。而且这一突变在2005年美国肉鸡群爆发、2008年我国蛋鸡群爆发以及目前本地鸡毒株中均有出现,与历次ALV-J的大流行密切相关。

自2012年首次鉴定新亚群ALV-K以来,其在多地被发现,尤其在黄鸡、本地鸡里阳性率较高。由于ALV-K的LTR区域的启动子活性较弱导致ALV-K体内复制能力较弱,易于逃避检测,感染鸡往往不产生肿瘤但会产生免疫抑制,且近年新分离的ALV-K基因非编码区容易发生重组和突变。

三、禽白血病检测技术体系

1.种群净化策略

讲者阐述了2008年爆发禽白血病后,2012年禽白血病就被列为《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》,2021年禽白血病被列为《全国肉鸡、蛋鸡遗传改良计划(2021-2035)》,均将禽白血病列为重点优化净化疫病,强调了国家层面对禽白血病净化的政策导向和政策要求。

2.主流检测方法与靶标选择

禽白血病无可用商业化疫苗,净化核心依赖全群检测,检测方法包括病毒分离(金标准)、群特异性抗原(p27)ELISA、胶体金快速检测、荧光定量PCR等。在检测靶标选择上,净化优先选择p27群特异性抗原作为检测靶标,可覆盖所有感染性活病毒,无需区分亚群,检测效率最高。

3. ELISA试剂盒研发历程

讲者团队利用针对ALV群特异性抗原的高亲和力单克隆抗体,研制了禽白血病病毒群特异ELISA抗原检测试剂盒,由于2个单抗分别针对不同的抗原表位,大幅提高了试剂盒的特异性和敏感性,解决了早期国产试剂盒批次稳定性不足的核心问题,于2016年正式上市

4.禽白血病检测技术体系

讲者历经15年,研发了禽白血病 ELISA群特异性抗原检测试剂盒、禽白血病化学发光抗原检测试剂盒、禽白血病特异性抗原检测金标试纸条、禽白血病AB亚群抗体检测试剂盒、禽白血病J亚群抗体检测试剂盒,5个产品均获得了新兽药注册证书,其中包括1个国家一类新兽药证书,2个国家二类新兽药证书。已建成覆盖病原检测、抗体检测、快速检测、高敏检测的全套禽白血病检测技术体系,检测试剂得到了大型家禽养殖育种企业、各级动物疫病控制中心、海关、三方检测机构的高度认可,市场占有率超过70%,打破了我国禽白血病净化主要依赖进口检测试剂的局面。

四、禽白血病净化技术体系建设

讲者提出建立完善的禽白血病净化技术体系需要满足三点要求,首先是稳定的检测试剂,其次是制定适合的净化技术方案(一场一策略),最后还需要规范的检测技术操作规程和稳定的人员队伍。

最后讲者提出了几点禽白血病净化的注意事项包括大规模净化需配备稳定的专职操作团队,采样无污染、样本采集后低温保存、检测试剂盒保持一致性、同步开展鸡传染性贫血病毒、网状内皮组织增生症病毒、马立克病毒等共感染病原监测,强化生物安全管理,避免多病原混合感染干扰净化效果。

五、会议总结

本次报告基于高玉龙研究员团队2016-2025年的禽免疫抑制病流行病学调查,梳理了国内主要病原的流行现状与防控难点,重点解析了禽白血病的病原分型、流行演变及毒株变异规律,并介绍了团队自主研发的系列检测试剂盒与全套标准化净化技术方案,为种禽场开展禽白血病净化、保障种源安全提供了清晰的技术路径与技术支撑。