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银水湾论坛会议笔记|田志军:我国猪蓝耳病疫苗和检测技术研究新进展

一、我国猪蓝耳病流行现状

猪蓝耳病(PRRS)自1995年在我国被发现以来,30 年间多数时候是危害我国养猪业的首要疾病。即便在非洲猪瘟影响显著的当下,“防非控蓝”仍是养猪业疫病防控的核心任务。PRRSV(猪繁殖与呼吸综合征病毒)是导致我国母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病的最主要直接病原或原发病原,能否有效控制其造成的损失,直接关系到规模化养猪企业的行业竞争力。

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12年的流行病学调查显示,2006-2015年,以高致病性PRRSVHP-PRRSV)为代表的L8分支病毒是我国主流流行株;2016年起,以类NADC30毒株为代表的L1分支逐渐成为优势株,截至2025年,其分布占比已超75%。在全球范围内(欧洲除外),L1分支也是主要流行株。当前流行的L1A变异株和类OYYZ PRRSV多为以类NADC30 PRRSV为骨架的重组病毒。

我国现有PRRSV疫苗以L8分支为主,而L1分支疫苗将成为未来20年防控产品的热点。

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关于类NADC34 PRRSVL1A 变异株)的流行现状:我国检出的类NADC34毒株为重组病毒,其基因组约三分之二的序列与类NADC30 PRRSV重叠。

我国类NADC30 PRRSV的特征如下:

临床发病特点:①仔猪呼吸道症状严重,死淘率达 10%-50%;②细菌继发感染情况突出;③母猪流产率显著升高。

分子特征:①形成独立分支(Sublineage 1.8);②非结构蛋白Nsp2存在特征性131个氨基酸缺失(111+1+19 模式);③重组模式复杂多样;④多数毒株难以通过细胞分离。

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现有商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的保护效果有限:近10年来,随着类NADC30毒株的流行,相关疫苗不断研发应用,但由于L1分支及8.7分支病毒变异快、时间跨度大,容易出现保护力下降的情况。

美国每年因PRRS造成的损失超12亿美元(每头出栏猪约12美元),其L1分支PRRSV疫苗研发处于世界领先水平。目前美国主流使用的Prevacent疫苗为减毒活疫苗(MLV),属于L1D分支,2018年上市后市场份额从20%升至2024年的60%,已在墨西哥、菲律宾、泰国、越南、韩国等地推广,即将进入台湾和日本市场。

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我国当前PRRSV流行的主要特点:

以类NADC30毒株为代表的L1分支是主流流行株,类HP-PRRSV次之,两者合计检出率超90%,病毒毒力以中等及以上为主。

不同养殖区域的PRRSV差异显著,推测病毒感染并非以外来输入为主要途径。

二、类NADC30猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(SD-R 株)的研制

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NADC30 PRRSV野毒株(SD 株)的筛选:类NADC30 PRRSV遗传多样性复杂,重组模式多样,重组热点集中在非结构蛋白NSP9及次要结构蛋白GP2a-4。绝大多数毒株对仔猪具有中等致病力,SD株以类NADC30 PRRSV为骨架,在NSP9GP2a-4蛋白的热点区域发生重组,是我国PRRSV变异流行株的代表性毒株。

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SD-R株的培育:通过3次噬斑克隆,在Marc-145细胞上连续传代,获得遗传稳定的疫苗候选株,命名为SD-R株(F125代)。

安全性评价:高剂量或重复剂量免疫仔猪后,仅个别猪在部分检测时间点出现低水平病毒血症,安全性良好。

保护效果评价:

同源保护:

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对类NADC30同源毒株(SD 株)可提供完全临床保护。

异源保护:

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针对类NADC30异源毒株(WK108 株,与SD株全基因组核苷酸同源性10.1%,中等致病力),可提供完全临床保护。

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针对类NADC34毒株(TZJ1341株),免疫组攻毒后无发热,7-14天血液病毒载量显著降低,血液和组织带毒猪数量少于对照组,保护效果良好。

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针对高致病性毒株(HuN4 株),免疫组仅部分猪出现一天体温≥40.5℃,无死亡,增重与空白对照组无显著差异,显著高于攻毒对照组,保护效果较好。

小结:

L1分支类NADC30为代表的PRRSV已成为我国主要流行毒株。

经传代致弱获得的类NADC30 PRRSV SD-R株,安全性与现有经典PRRSV活疫苗相当(10倍剂量接种4周龄仔猪无体温反应,病毒血症水平低)。

效力试验显示,SD-R株对同源和异源类NADC30毒株可产生完全临床保护,对类NADC34毒株和HP-PRSV也可产生较好保护,为我国猪蓝耳病防控提供了新手段和策略。

三、猪蓝耳病单抗阻断ELISA抗体检测试剂盒的研制

研究背景:猪常见传染病的抗体检测中,国际主流方法为单抗阻断ELISA(包被抗原为全病毒),具有高特异性和敏感性,其技术瓶颈在于能否获得具有特异广谱检测价值的单抗。

哈兽研研发的N蛋白阻断ELISA试剂盒,与商品化试剂盒(IDEXX、金诺)的比较如下:

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该试剂盒的优势:

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特异性强:基于病毒特异性单抗和全病毒包被,对6种猪常见传染病阳性血清检测均为阴性,对其他谱系毒株阳性血清均为阳性,特异性和广谱性良好。

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敏感性高:血清4倍稀释可提高敏感性,检出限比IDEXX高一个滴度;对高致病性疫苗毒(HuN4-F112)免疫后2周即可检测到抗体,PI%IDEXX S/P 值呈强线性关系;对类MLV毒株(SDHS192)免疫后7 天转阳(IDEXX10 天),PI%IDEXX S/P值呈指数关系,与IDEXX试剂盒符合率达94.35% 

对我国PRRS主要流行株的抗体检测结果显示:

可检测Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ谱系毒株及欧洲型等国内流行毒株。

高致病性疫苗免疫后2周抗体转阳,PI值与IDEXX S/P 值呈强线性关系(按周采血)。

MLV、类NADC30、类NADC34 攻毒或免疫后7-10天抗体转阳,PI值与IDEXX S/P值呈强指数关系(按天采血)。

小结:

国际上首次成功研制PRRSV N蛋白单抗阻断ELISA抗体检测试剂盒。

适用于PRRSV阴性猪场的抗体监测、阳性猪场感染强度判定及猪蓝耳病活疫苗抗体水平评估。

四、猪蓝耳病的防控策略

种猪防控策略:种源性疫病的防控核心是种猪。猪场PRRS通常先从妊娠母猪开始(影响生产性能),再传播至仔猪,且仔猪病原与母猪场一致;猪场种源多样性与PRRSV复杂性高度相关。

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蓝耳阴性母猪场(原种场):需维持阴性状态,制定转阳应对预案。

蓝耳阳性稳定场:需维持稳定状态,做好活跃期应对准备。

蓝耳阳性活跃场(商品场,平均出栏猪药费超30元):需通过有效免疫和驯化实现长期稳定。

引种时应促进现有种猪与引进种猪快速融合稳定;阳性稳定的商品母猪群(经免疫或驯化)与双阴性母猪群一样,可生产双阴性仔猪,这是培育阳性稳定商品母猪群的关键。

仔猪防控策略:“蓝耳病搭台,细菌唱戏”——同一PRRSV 毒株对不同来源(地域、养殖规模等)仔猪的致病力(引发细菌继发感染的程度)差异较大,可能导致高死淘率和高药费。

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蓝耳阴性及阳性稳定仔猪场:需维持现状,制定转阳应对策略。

蓝耳阳性活跃仔猪场(平均出栏猪药费超 30 元):需通过有效免疫和驯化降低出栏药费。

仔猪防控效果与母猪群防控效果高度相关。

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总结

猪蓝耳病是危害我国养猪业的最重要疫病之一,当前处于PRRSV活跃期,以类NADC30毒株为主的L1分支是主要流行株,类HP-PRRSV次之。“与蓝共舞”“与蓝俱进”是养猪业必须长期面对的现实,需积极应对。

认清猪蓝耳病的主要危害,解决问题需抓住“主要矛盾”,基于“利大于弊”原则,选择适合自身且性价比高的防控方案。

 


会议笔记由哈尔滨国生生物医学检验实验室有限公司杨志超记录整理。